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本试剂盒通过离子交换吸附柱获得高纯度的质粒DNA。中和后的裂解液混合物中的核酸在特定条件下与离子交换柱中可交换的离子进行交换，通过漂洗步骤去除盐、内毒素等其它杂质。

本试剂盒中使用的离子交换吸附柱DNA最大载量为500μg。纯化的质粒DNA可直接用于转化、DNA测序、酶切、标记、转染、PCR和southern blotting等下游实验。

• 高纯度的质粒DNA，可用于转染实验。
  
• 回收效率高，最多可获得500μg的质粒DNA。
  
• 适用于BAC/PAC/P1等大型质粒DNA的提取
  
• 无需使用酚/氯仿，无需CsCl梯度离心。

纯化方法：离子交换柱
形式：重力流纯化
菌液用量：100～200mL过夜培养的大肠杆菌
质粒DNA产量：200～500μg
A₂₆₀/A₂₈₀：1.8左右
纯化时间：3小时
最大吸附量：500μg

组分	2次	10次
Ion Exchange Maxi Column	2个	10个
Collection Tube	2个	10个
Buffer MP1	28mL	140mL
Buffer MP2	28mL	140mL
Buffer MP3	28mL	140mL
Buffer EBT	44mL	220mL
Buffer EW	55mL	280mL
Buffer EF	24mL	120mL
RNase A	420μL	5 x 420μL
Elution Buffer	5mL	30mL

保存：室温，Buffer MP1加入RNase A后请与4℃保存，有效期见包装。


Buffer MP2和Buffer MP3中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。


50mL离心管，异丙醇，70%乙醇。


试剂盒初次开启，请将RNase A加入至Buffer MP1中，充分混匀后在瓶身做好标记。储存于2～8℃，有效期6个月。
每次使用前请检查Buffer MP2和Buffer MP3是否出现沉淀，如有沉淀，请于37℃溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

• 对于高拷贝质粒，取100～200mL过夜培养的菌液(OD₆₀₀=2.5～5)，6000×g室温离心10min。吸净上清。
  
• 向菌体沉淀中加入12mL Buffer MP1，吸打或振荡至彻底悬浮菌体。
  
• 加入12mL Buffer MP2，立即温和颠倒混匀4～6次，室温静止5分钟。避免剧烈振荡，以防止基因组DNA污染。
  
• 加入12mL MP3，立即温和颠倒混匀，室温静止5分钟。.
  
• 15000×g离心10分钟。
  
• 将Ion Exchange Maxi Column置于50mL离心管上，加入20mL Buffer EBT，在重力作用下流空纯化柱(大约20分钟)，弃流穿液。注意避免柱子过干。
  
• 将第5步获得的上清液转移至一个新的50mL离心管中，15000×g离心5分钟。
  
• 将上清液转移至第6步的Ion Exchange Maxi Column中，在重力作用下流空纯化柱，弃流穿液。
  
• 向Ion Exchange Maxi Column中加入25mL Buffer EW，在重力作用下流空纯化柱，弃流穿液。
  
• 将Ion Exchange Maxi Column转移至一个新的50mL离心管中，加入10mL Buffer EF，在重力作用下流空纯化柱，收集离心管中液体。
  
• 加入0.75体积的异丙醇，混匀。15000×g离心30分钟。小心弃掉上清液。
  
• 用5mL 70%乙醇清洗质粒DNA，15000×g离心10分钟收集沉淀。
  
• 再次离心，弃净上清，空气中使质粒DNA完全干燥。弃上清时避免带走底部沉淀。
  
• 用适量的Elution Buffer或ddH2O溶解质粒DNA。

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